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EHS細(xì)胞-臨床醫(yī)學(xué)

EHS細(xì)胞-臨床醫(yī)學(xué)

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經(jīng)營范圍:國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品、冶金標(biāo)樣、標(biāo)準(zhǔn)氣體、藥典對照品、標(biāo)準(zhǔn)菌種、實(shí)驗(yàn)室耗材、試劑盒

 

產(chǎn)品信息:EHS細(xì)胞-臨床醫(yī)學(xué)

標(biāo)準(zhǔn)名稱:EHS細(xì)胞-臨床醫(yī)學(xué)

產(chǎn)品簡介:

<1>細(xì)胞培養(yǎng)

  • 細(xì)胞請于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),大部分細(xì)胞是37℃,5% CO2,濕度100%環(huán)境下培養(yǎng)的。有極少部分細(xì)胞培養(yǎng)條件不*,請仔細(xì)閱讀相應(yīng)的細(xì)胞說明書,使用正確的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件;
  • 細(xì)胞于培養(yǎng)瓶或皿中培養(yǎng),加入適量說明書上標(biāo)注的細(xì)胞相應(yīng)*培養(yǎng)基(一般液面高度2-3mm即可)。

<2>細(xì)胞傳代(以下步驟適用于10cm皿)

  • 細(xì)胞培養(yǎng)至密度達(dá)80%以上時(shí)即可傳代,先將細(xì)胞培養(yǎng)基取出3mL用15mL離心管裝好,其他培養(yǎng)基全部吸干舍棄;
  • 培養(yǎng)皿加入2-3mL無菌PBS,輕輕晃動(dòng)皿,使PBS浸洗到皿底所有部位,PBS吸干舍棄;
  • 加入1mL胰酶,輕輕晃動(dòng)皿,使胰酶浸沒到皿底所有部位,將皿蓋好放入培養(yǎng)箱中消化;

3min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞不再貼壁,即可加入*步收集的培養(yǎng)基混勻;

  • 若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至不貼壁為止;
  • 將細(xì)胞懸液均勻分成幾份,分別加入不同培養(yǎng)皿中,補(bǔ)加新培養(yǎng)基后放回培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

<3>相關(guān)問題

  • 部分細(xì)胞在傳代后時(shí),會(huì)有以下現(xiàn)象:細(xì)胞內(nèi)會(huì)有黑色小點(diǎn)、細(xì)胞間隙有些顆粒物、培養(yǎng)基漂浮一些死細(xì)胞或者細(xì)胞長的極慢。出現(xiàn)以上現(xiàn)象時(shí),可以咨詢本公司技術(shù)人員此現(xiàn)象是否正常及相關(guān)處理方式,不要頻繁換液,大多數(shù)細(xì)胞1周換液2-3次即可。
  • 細(xì)胞碎片較多、背景較臟時(shí),貼壁細(xì)胞用PBS漂洗兩次、懸浮細(xì)胞打散后低速離心(900rpm,3min)能有效改善。
  • 傳代比例建議1:2-1:3,長得比較快的細(xì)胞可以1:3,比較慢的按1:2傳代。傳代后,建議不要使用傳代前培養(yǎng)所使用的培養(yǎng)基,會(huì)有大量細(xì)胞碎片甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡的風(fēng)險(xiǎn)。
  • 細(xì)胞狀態(tài)不好或者生長極慢的時(shí)候,可以通過增加血清濃度調(diào)整細(xì)胞狀態(tài)及生長速度。
  • 請不要隨意更換培養(yǎng)基,因?qū)嶒?yàn)需要,可以逐步馴化。

懸浮傳代:混勻細(xì)胞,收集細(xì)胞懸液900-1000rpm離心3min,棄上清。再加5ml PBS重懸細(xì)胞,再離心后,用*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片,如果平時(shí)碎片比較少,傳代時(shí)可以省略PBS重懸的步驟;如果碎片很多,建議PBS多洗一次。

  • 細(xì)胞凍存

<1>凍存操作

  • 凍存液配方:建議使用92%FBS+8%DMSO,客戶自身實(shí)驗(yàn)室所使用的凍存液也可以適用,血清濃度不低于30%,DMSO含量不高于12%即可。
  • 收集細(xì)胞按照以上細(xì)胞傳代步驟操作至第④步后,將細(xì)胞懸液收集入15mL離心管,離心(1200rpm,3min);
  • 棄上清,加入配制好的凍存液,重懸細(xì)胞,懸液加入無菌凍存管中;
  • 將凍存管在4℃靜置10min,后將之正置于室溫下的厚壁有蓋泡沫盒中,蓋緊盒蓋,放入-80℃冰箱過夜,第二天放入液氮即可長期保存。

<2>相關(guān)問題

  • 10cm皿的細(xì)胞長滿一般可以凍存2-3管,部分細(xì)胞長的比較慢,凍存的細(xì)胞密度要稍微大點(diǎn),以防止復(fù)蘇后生長困難。
  • 凍存液中含的DMSO請使用細(xì)胞級DMSO,同時(shí)濃度不要太高。部分細(xì)胞在10%DMSO條件下凍存會(huì)死亡,所以DMSO濃度5%-8%是比較推薦的濃度。
  • 細(xì)胞凍存及復(fù)蘇遵循慢凍快融的原則,即凍存時(shí)溫度不能急劇下降,應(yīng)控制溫度緩慢下降。復(fù)蘇時(shí)應(yīng)快速融化,融化后盡快加入培養(yǎng)基中。
  • 凍存時(shí)建議設(shè)置凍存檢測,即取0.2-0.3mL的凍存液重懸的細(xì)胞于一個(gè)凍存管中,與正常體積凍存的細(xì)胞共同凍存,至液氮后復(fù)蘇檢查凍存結(jié)果。凍檢合格前,留一部分細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng),以防萬一。

另外,我們提供各種不同濃度的單標(biāo)及混標(biāo)定制服務(wù),包含【十大系列】(真誠合作,誠招代理):

· 中藥對照品

· 分析滴定液

· 指示劑溶液

· 農(nóng)殘類標(biāo)準(zhǔn)溶液

· 水質(zhì)檢測標(biāo)準(zhǔn)溶液

· TOC/TIC標(biāo)準(zhǔn)液

· 原子吸收光譜儀標(biāo)準(zhǔn)液

· PH緩沖液(PH校正液@25℃)

· 比色計(jì)標(biāo)準(zhǔn)液(鉑鈷比色標(biāo)準(zhǔn)液)

· 離子層標(biāo)準(zhǔn)液(陰離子標(biāo)準(zhǔn)液、陽離子標(biāo)準(zhǔn)液)

 

公司簡介:

中國標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)網(wǎng)隸屬于北京普天同創(chuàng)生物科技有限公司,是國內(nèi)最早的專業(yè)化標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)信息平臺(tái)。創(chuàng)建以來,一直專注于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的推廣與銷售,是多家知名標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制單位和分析儀器公司的代理商,代理銷售國內(nèi)外數(shù)萬種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和標(biāo)準(zhǔn)樣品,同時(shí)經(jīng)營各類精細(xì)化工產(chǎn)品及計(jì)量設(shè)備,業(yè)務(wù)遍及國內(nèi)外眾多檢測機(jī)構(gòu)、科研院校和工廠企業(yè),在業(yè)界具有較強(qiáng)的影響力。

 

 

 

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